RAP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401709

Panoramica

TERF2IP codifica RAP1, un componente centrale del complesso shelterin che si associa al fattore legante le ripetizioni telomeriche 2 (TRF2) per contribuire a proteggere le estremità dei cromosomi da un’attivazione inappropriata dei segnali di danno al DNA e da fusioni estremità‑a‑estremità. Oltre alla protezione delle estremità telomeriche, RAP1 contribuisce all’omeostasi della lunghezza dei telomeri, alle risposte allo stress replicativo a livello dei telomeri e, più in generale, alla stabilità del genoma attraverso il coordinamento delle vie di riparazione del DNA e dei checkpoint. RAP1 è stato inoltre implicato nella regolazione trascrizionale in siti extra‑telomerici, collegando la biologia dei telomeri alla cromatina e ai programmi di espressione genica. La deregolazione della funzione di TERF2IP/RAP1 è rilevante per fenotipi di disfunzione telomerica, instabilità genomica e processi di trasformazione cellulare studiati in modelli di cancro e di invecchiamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RAP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TERF2IP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TERF2IP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TERF2IP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RAP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TERF2IP per lo studio della segnalazione di RAP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TERF2IP critici per la funzione di RAP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TERF2IP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TERF2IP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RAP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RAP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TERF2IP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TERF2IP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.