Plásmido Doble Nickase (m) RANTES: sc-422845-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)RANTES consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RANTES (m) y el plásmido de doble nickasa RANTES (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ccl5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RANTES Anticuerpo (A-4): sc-365826
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) RANTES | sc-422845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) RANTES | sc-422845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Ccl5 en ratón codifica RANTES, una quimiocina que coordina el tráfico de leucocitos al unirse a CCR1, CCR3 y CCR5 para promover la quimiotaxis, la adhesión y la activación de células inmunitarias. La señalización de RANTES se integra con vías dependientes de GPCR que regulan la remodelación de la actina, la activación de integrinas y las redes de citocinas, configurando microambientes inflamatorios en tejidos periféricos. La alteración de la expresión de Ccl5 se estudia con frecuencia en modelos de inflamación crónica, patología autoinmune, infección viral e interacciones tumor-inmunidad, donde el reclutamiento de células mieloides y T influye en los fenotipos de la enfermedad. Como mediador clave del posicionamiento de células inmunitarias, Ccl5 se utiliza ampliamente para investigar la vigilancia inmunitaria, la inflamación tisular y la comunicación cruzada entre estroma y sistema inmunitario en sistemas murinos.
RANTES El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ccl5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ccl5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ccl5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ccl5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.