PTPLAD2 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-417162-ACT-2

ヒトHACD4（PTPLAD2をコードする）は、超長鎖脂肪酸（VLCFA）の伸長に関与すると推定される3-ヒドロキシアシルCoAデヒドラターゼ様酵素であり、脂質代謝の恒常性、膜の生合成、ならびに小胞体関連プロセスと結び付けられている。脂肪酸リモデリングにおける予測上の役割を介して、HACD4／PTPLAD2はリン脂質組成の制御、細胞小器官の完全性、増殖や分化に影響する細胞ストレス応答を司る経路に関連する。脂質伸長ネットワークの制御異常やPTPLAD2に関連したシグネチャーは、代謝機能障害やがん関連生物学の文脈で報告されており、脂質駆動性の表現型を研究するための機構的ハブとしての有用性を支持している。HACD4の遺伝子編集は、VLCFA代謝の機能的解析、下流シグナル伝達およびトランスクリプトーム適応の検証、さらにリピドミクス、ERストレス、膜動態研究のための細胞モデルの開発を可能にする。

PTPLAD2 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HACD4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PTPLAD2 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における HACD4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHACD4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PTPLAD2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHACD4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPTPLAD2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHACD4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPTPLAD2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。