PTH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422490

Panoramica

Il gene **Pth** del topo codifica l’ormone paratiroideo (PTH), un peptide secreto che mantiene l’equilibrio sistemico di calcio e fosfato tramite la segnalazione attraverso il recettore **PTH1**, regolando il rimodellamento osseo, il riassorbimento tubulare renale e l’escrezione del fosfato. La segnalazione GPCR indotta dal PTH coinvolge le vie **cAMP/PKA** e **PLC/PKC** e influenza l’accoppiamento osteoblasti–osteoclasti attraverso mediatori a valle quali **RANKL** e **OPG**. In condizioni fisiologiche, l’espressione di **Pth** integra il feedback del calcio circolante e del metabolismo della vitamina D per coordinare l’omeostasi degli ioni minerali. Una segnalazione del PTH deregolata è ampiamente rilevante per la ricerca sul turnover scheletrico, sui disturbi del metabolismo minerale e sulla regolazione endocrina del crosstalk lungo l’asse rene–osso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTH (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pth in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pth insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pth a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pth per lo studio della segnalazione di PTH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pth critici per la funzione di PTH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pth per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PTH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PTH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pth. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PTH Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PTH (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pth per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pth definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.