PTEN Double Nickaseプラスミド (h): sc-400103-NIC

PTENは脂質およびタンパク質の両方を基質とする二重特異性ホスファターゼであり、PIP3を脱リン酸化することでPI3Kシグナル伝達に拮抗し、その結果としてAKTの活性化と下流のmTOR経路の出力を抑制します。この機能を通じて、PTENは細胞の増殖・生存・代謝・遊走を統合的に制御し、ゲノム安定性や細胞極性の維持にも寄与します。PTENの喪失または活性低下は、多様な生物学的状況において、増殖シグナルの制御破綻や免疫・微小環境との相互作用の変化としばしば関連します。そのためPTENは、膜シグナル伝達と転写・代謝プログラムを結び付ける経路の研究で広く扱われています。

PTEN ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PTEN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PTEN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PTENの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PTENが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。