PTBP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404312-ACT

O PTBP2 humano codifica a proteína ligante de RNA PTBP-2, um regulador do splicing alternativo de pré-mRNA enriquecido em neurônios, que influencia a inclusão de éxons, a estabilidade do mRNA e a tradução durante a neurogênese e a maturação sináptica. A PTBP-2 coordena a seleção de sítios de splicing em transcritos envolvidos na diferenciação neuronal, na remodelação do citoesqueleto e na expressão gênica dependente de atividade, interagindo com redes regulatórias pós-transcricionais que moldam a identidade celular. Alterações na expressão de PTBP2 ou nos programas de splicing têm sido associadas a um desenvolvimento neuronal desregulado e a padrões anômalos de processamento de RNA observados em contextos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas. Como moduladora do equilíbrio de isoformas de transcritos, a PTBP-2 é amplamente estudada por conectar decisões de splicing ao comprometimento de linhagem neural e à função neuronal.

PTBP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTBP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTBP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTBP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTBP-2 em células tumorais com expressão de PTBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.