PSR Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430761-ACT

Il gene murino **Jmjd6** codifica la proteina **PSR**, una diossigenasi dipendente da 2‑ossoglutarato che influenza il controllo trascrizionale e la regolazione dell’RNA attraverso l’idrossilazione di lisine e la demetilazione di arginine di substrati nucleari. PSR è stata collegata alla regolazione dello splicing alternativo e di programmi di espressione genica associati alla cromatina, interfacciandosi con vie che coordinano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la trascrizione in risposta allo stress. Un’attività deregolata di JMJD6/PSR è stata associata a segnali proliferativi aberranti e a un’alterata espressione di geni dello sviluppo, rendendola rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro, nelle vie legate alla fibrosi e nella specificazione di linea. Nei sistemi murini, la perturbazione di **Jmjd6** è comunemente utilizzata per interrogare meccanismi epigenetici e post-trascrizionali che plasmano l’identità cellulare.

PSR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Jmjd6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Jmjd6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Jmjd6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Jmjd6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSR nelle cellule tumorali con espressione di Jmjd6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.