Plásmido CRISPR de Activación (h) PSMD11: sc-410966-ACT

PSMD11 codifica una subunidad reguladora no ATPasa de la tapa del proteasoma 26S que respalda la degradación de proteínas dependiente de ubiquitina y la proteostasis. Al promover un ensamblaje eficiente del proteasoma y el procesamiento de sustratos, PSMD11 influye en el recambio de reguladores del ciclo celular, factores de transcripción y proteínas mal plegadas, vinculándolo con vías como el control del ciclo celular, las respuestas al estrés y el procesamiento de antígenos. La alteración de la actividad de subunidades reguladoras del proteasoma se ha asociado con desequilibrios en la homeostasis proteica y con programas de adaptación celular observados en contextos relevantes para el cáncer y la neurodegeneración. Por ello, PSMD11 se estudia con frecuencia como modulador de la capacidad del proteasoma y de la resiliencia al estrés proteotóxico en células humanas.

PSMD11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PSMD11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PSMD11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PSMD11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PSMD11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PSMD11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PSMD11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PSMD11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PSMD11 en células tumorales con expresión de PSMD11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.