PSMD1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-427651-ACT

Il gene murino *Psmd1* codifica PSMD1, una subunità core non-ATPasi della particella regolatoria 19S del proteasoma 26S, che contribuisce alla degradazione proteica ubiquitina-dipendente e al mantenimento della proteostasi. Supportando il riconoscimento e la processazione di substrati poliubiquitinati, PSMD1 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e gli esiti di segnalazione che dipendono dal turnover proteico regolato, incluse vie collegate all’attività di NF-κB e alle risposte al danno al DNA. L’alterazione di componenti regolatori del proteasoma può rimodellare la processazione dell’antigene, l’adattamento metabolico e la sensibilità all’apoptosi, rendendo *Psmd1* un nodo utile per studiare fenotipi associati alla proteostasi in modelli murini cellulari e tissutali. La disfunzione del proteasoma è ampiamente associata a stati infiammatori e alla trasformazione oncogenica, fornendo un contesto meccanicistico per l’interrogazione di vie incentrate su PSMD1 senza implicare esiti terapeutici.

PSMD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Psmd1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSMD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Psmd1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Psmd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSMD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Psmd1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSMD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSMD1 nelle cellule tumorali con espressione di Psmd1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.