PRX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405108-ACT

PRRX1 codifica la proteina homeobox PRX1 (paired related), un fattore di trascrizione che regola le scelte di destino delle cellule mesenchimali durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale. PRX1 influenza i programmi di transizione epitelio-mesenchimale (EMT), l’attivazione dei fibroblasti e l’organizzazione della matrice extracellulare coordinando reti trascrizionali coinvolte in migrazione, adesione e differenziamento. Nella biologia umana, un’alterata attività di PRRX1 è stata associata a cambiamenti nella segnalazione stromale e a fenotipi invasivi, rendendolo rilevante per studi sulla dinamica del microambiente tumorale, sui pathway associati alla fibrosi e sulla progressione metastatica. In quanto regolatore nucleare, PRX1 è spesso utilizzato come marcatore e come nodo meccanicistico nel lineage tracing e nella mappatura dei circuiti trascrizionali in stati cellulari mesenchimali e simil-staminali.

PRX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRRX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRRX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRRX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRRX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRX1 nelle cellule tumorali con espressione di PRRX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.