Prohibitin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401282-ACT

O PHB2 codifica a prohibitina 2, uma proteína estrutural conservada, enriquecida na membrana interna mitocondrial e no núcleo, que ajuda a manter a arquitetura das cristas mitocondriais, a integridade da cadeia respiratória e o controle da mitofagia. A prohibitina 2 participa de vias de controle de qualidade mitocondrial, incluindo a remodelação de membrana dependente de OPA1 e a renovação associada a PINK1/Parkin, e pode influenciar programas do ciclo celular e de transcrição por meio de interações com receptores nucleares e fatores associados à cromatina. Alterações na expressão ou na localização de PHB2 têm sido associadas à fosforilação oxidativa prejudicada, ao aumento da sinalização por espécies reativas de oxigênio e a mudanças na suscetibilidade à apoptose. Essas funções tornam o PHB2 relevante para estudos mecanísticos de reprogramação metabólica, respostas ao estresse e disfunção mitocondrial associada à neurodegeneração e ao câncer.

Prohibitin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PHB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Prohibitin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PHB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PHB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Prohibitin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PHB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Prohibitin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Prohibitin 2 em células tumorais com expressão de PHB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.