PRK2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430934

Panoramica

Il gene murino Pkn2 codifica la protein kinase C–related kinase 2 (PRK2), una chinasi serina/treonina della famiglia AGC che funge da effettore delle Rho GTPasi, collegando il rimodellamento del citoscheletro alla trasduzione del segnale. PRK2 partecipa a vie che regolano la dinamica dell’actina, il turnover delle adesioni focali, la polarità cellulare e la segnalazione in risposta allo stress, con ulteriori ruoli riportati nel controllo trascrizionale e nella progressione del ciclo cellulare. Attraverso interazioni con RhoA e con proteine scaffold associate, PRK2 può influenzare programmi di migrazione e morfogenesi spesso studiati in biologia dello sviluppo e del cancro. Una segnalazione associata a PRK2 deregolata è stata collegata a fenotipi proliferativi e invasivi alterati in sistemi modello, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici di stati cellulari correlati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRK2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pkn2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pkn2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pkn2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRK2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pkn2 per lo studio della segnalazione di PRK2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pkn2 critici per la funzione di PRK2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pkn2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pkn2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRK2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRK2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pkn2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pkn2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.