Prestin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401428-ACT

SLC26A5 は、膜結合型の陰イオントランスポーター様モータータンパク質であるプレスチンをコードしており、蝸牛の外有毛細胞に高度に濃縮して発現しています。プレスチンは膜電位の変化を高速な電気運動性（electromotility）へと変換します。この電気機械的な変換は、蝸牛の増幅作用と鋭い周波数選択性（チューニング）を支え、形質膜における電位依存的な構造変化サイクルとイオン恒常性の統合に寄与します。プレスチンの活性は、上皮のイオン輸送過程や、聴覚機能に必要な特殊化した細胞骨格および膜の力学特性と関連しています。SLC26A5 の発現や機能の変化は感音難聴の表現型と関連し、毛細胞バイオメカニクスや聴覚経路の調節異常を研究するための分子レベルの足掛かりとして用いられています。

Prestin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC26A5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Prestin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC26A5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC26A5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Prestinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC26A5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPrestin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC26A5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPrestin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。