Presenilin 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403532-ACT

PSEN2 codifica la presenilina 2, un componente catalitico del complesso γ-secretasi che media la proteolisi intramembrana di numerose proteine di membrana di tipo I, incluse APP e i recettori Notch. Attraverso l’attività della γ-secretasi, la presenilina 2 contribuisce alla segnalazione Notch, alla proteolisi intramembrana regolata e ai programmi trascrizionali a valle che controllano le decisioni sul destino cellulare. PSEN2 è inoltre collegato alla biologia endolisosomiale e mitocondriale, all’omeostasi del calcio e al traffico di membrana, processi che influenzano la funzione neuronale e le risposte allo stress. La variabilità genetica e l’alterata funzione della presenilina 2 sono associate a fenotipi neurodegenerativi, in particolare a vie correlate alla malattia di Alzheimer che coinvolgono l’elaborazione amiloidogenica di APP e l’integrità sinaptica.

Presenilin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSEN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Presenilin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSEN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSEN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Presenilin 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSEN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Presenilin 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Presenilin 2 nelle cellule tumorali con espressione di PSEN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.