PPP2R3A Double Nickaseプラスミド (h): sc-402433-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PPP2R3A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PPP2R3Aダブルニカースプラスミド（h）およびPPP2R3Aダブルニカースプラスミド（h2）は、PPP2R3Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PPP2R3A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402433-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PPP2R3A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402433-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP2R3A は、プロテインホスファターゼ2A（PP2A）の調節性B″サブユニットである PR130 をコードしており、PP2A ホロ酵素の組み立て、細胞内局在、ならびに基質選択の制御に寄与します。PP2A による脱リン酸化を介して、PPP2R3A は細胞周期進行、細胞骨格の構築、そしてキナーゼ駆動の入力を統合するシグナル伝達カスケードといった、リン酸化依存的な制御に影響を及ぼします。PP2A の調節異常は、増殖やストレス応答シグナルの破綻と広く関連しており、PPP2R3A の発現や機能の変化は、がん関連経路の再配線や、その他のリン酸化異常を基盤とする疾患機構の文脈で研究されてきました。そのため PPP2R3A は、PP2A の基質特異性が下流の経路出力や細胞表現型をどのように規定するかを解明する目的で、しばしば解析対象となります。
PPP2R3A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PPP2R3A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PPP2R3A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PPP2R3Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PPP2R3Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。