PP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405979-ACT

PPP5C codifica a fosfatase de proteínas serina/treonina 5 (PP5), uma fosfatase com domínio TPR que integra a sinalização por meio de sua associação a complexos de chaperonas HSP90 e a múltiplas proteínas cliente. A PP5 regula o controle dependente de fosforilação de respostas ao estresse, progressão do ciclo celular e sinalização de dano ao DNA, incluindo a modulação de vias ligadas à sinalização ATM/ATR e a redes MAPK. Por meio da desfosforilação de reguladores-chave, o PPP5C influencia a função do receptor de glicocorticoides, o controle de checkpoints e a proteostase, tornando-se um nó útil para estudar a fidelidade da transdução de sinal. A atividade ou expressão desregulada de PPP5C tem sido associada a fenótipos de proliferação e tolerância ao estresse alterados, relatados em contextos de câncer e neurobiologia, o que sustenta sua relevância em modelos mecanísticos de doença.

PP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP5C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP5C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP5C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP5C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP5 em células tumorais com expressão de PPP5C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.