Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Cβ (h): sc-400937

Présentation

PPP2CB code la sous-unité catalytique bêta de la protéine phosphatase 2A (PP2A-Cβ), une phosphatase majeure des sérines/thréonines qui forme des holoenzymes PP2A hétérotrimériques avec diverses sous-unités régulatrices B afin de contrôler la spécificité des substrats et la localisation subcellulaire. PP2A-Cβ contrebalance la signalisation des kinases en déphosphorylant des nœuds clés de voies qui régissent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress, notamment AKT/MAPK ainsi que de multiples régulateurs mitotiques. Par ces activités, PP2A contribue à maintenir l’homéostasie de la phosphorylation, influençant les programmes transcriptionnels, la dynamique du cytosquelette et le contrôle métabolique. Une signalisation PP2A dérégulée et une expression ou une régulation altérées de PPP2CB ont été associées à une prolifération anormale et à des signaux de survie, avec un intérêt particulier en oncologie et dans des études de neurobiologie portant sur les réseaux de signalisation dépendants des phosphatases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Cβ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPP2CB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPP2CB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPP2CB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP2A-Cβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPP2CB pour l'étude de la signalisation de PP2A-Cβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PPP2CB essentiels à la fonction de PP2A-Cβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPP2CB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PP2A-Cβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PP2A-Cβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPP2CB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PP2A-Cβ plasmide HDR (h) et le PP2A-Cβ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPP2CB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPP2CB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.