Plásmido Doble Nickase (h) PP2A-Cα: sc-400613-NIC

PPP2CA codifica la subunidad catalítica Cα de la fosfatasa de proteínas 2A (PP2A), una importante fosfatasa de serina/treonina que forma complejos heterotriméricos con la subunidad de andamiaje A y diversas subunidades reguladoras B para controlar la especificidad de sustrato. PP2A-Cα regula la señalización dependiente de fosforilación a lo largo de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la dinámica del citoesqueleto, con funciones destacadas en la modulación de las vías MAPK, PI3K/AKT y Wnt/β-catenina. Mediante la desfosforilación coordinada de quinasas clave y proteínas estructurales, PPP2CA ayuda a mantener la proteostasis y la fidelidad de los puntos de control. La actividad desregulada de PP2A y la función alterada de PPP2CA se han asociado con redes de fosforilación aberrantes observadas en múltiples cánceres y en contextos de enfermedades neurodegenerativas, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de señalización.

PP2A-Cα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPP2CA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPP2CA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPP2CA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPP2CA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.