POT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403275-ACT

POT1（protection of telomeres 1）は、一本鎖テロメアDNAに結合してテロメア末端の保護を制御するシェルテリン複合体の中核構成因子をコードします。テロメラーゼのアクセスを制御し、染色体末端における不適切なATR依存性DNA損傷シグナル伝達を抑制することで、POT1はテロメア長の恒常性とゲノム安定性の維持に寄与します。POT1機能の変化は、テロメア機能不全、複製ストレス、染色体不安定性と関連しており、これらの過程は細胞老化やがん化（腫瘍化）に影響します。テロメア維持因子として、POT1はDNA複製、損傷応答、染色体末端処理を制御する経路において広く研究されています。

POT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

POT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性POT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPOT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPOT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。