POGZ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410566-ACT

POGZ (proteína derivada de elemento transponível pogo com dedo de zinco) é um fator nuclear associado à cromatina que regula programas de transcrição ao coordenar a ligação ao DNA e interações proteína–proteína em regiões regulatórias de genes. Contribui para a organização da cromatina e a estabilidade do genoma ao influenciar a progressão mitótica e a coesão entre cromátides-irmãs por meio de interações com a maquinaria ligada à heterocromatina, impactando o controle do ciclo celular e redes de expressão gênica do desenvolvimento. A desregulação da regulação de cromatina dependente de POGZ tem sido associada a fenótipos de neurodesenvolvimento e a alterações na diferenciação neuronal, tornando-a relevante para estudos de controle transcricional no desenvolvimento do cérebro. Em células humanas, o POGZ é frequentemente investigado no contexto de regulação epigenética, especificação do destino celular e efeitos em nível de vias sobre programas de expressão de RNA.

POGZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POGZ sem alterar a sequência de ADN subjacente.

POGZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POGZ em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POGZ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de POGZ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POGZ nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de POGZ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via POGZ em células tumorais com expressão de POGZ silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.