Podocin CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-400930-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- Podocin CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- Podocin CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- Podocin CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 Podocin CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 NPHS2 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
Podocin CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-400930-ACT | 20 µg | $397.00 |
NPHS2는 포도신(podocin)을 암호화하며, 포도신은 신장 족세포(podocyte)의 슬릿 다이아프램(slit diaphragm)에 풍부하게 존재하는 막관통 단백질로서 사구체 여과장벽의 무결성에 필요한 신호 및 구조 구성요소들을 스캐폴딩(지지·조립)합니다. 포도신은 지질 뗏목(lipid raft) 미세영역에서 네프린(nephrin)과 CD2AP와 상호작용하여 액틴 세포골격의 역동성, 기계적 감지(mechanosensing), 그리고 특수화된 세포 접합부의 유지에 기여합니다. NPHS2에 의존하는 슬릿 다이아프램 조직화가 붕괴되면 족세포 항상성이 교란되고 단백뇨성 신장질환 표현형과 강하게 연관되므로, 여과장벽 실패를 연구하는 데 중요한 핵심 노드로 여겨집니다. 따라서 NPHS2는 사구체 생물학에서 족세포 분화, 접합부 신호전달 경로, 유전자형–표현형 관계를 탐구하는 데 널리 활용됩니다.
Podocin CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 NPHS2 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
Podocin CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 NPHS2 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 NPHS2 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 Podocin 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 NPHS2 위치를 보존하고 내인성 위치에서 Podocin 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 NPHS2 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 Podocin 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.