PMS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422324

Panoramica

Il gene murino **Pms2** codifica la proteina PMS2, un componente fondamentale del complesso di riparazione dei mismatch **MutLα** insieme a MLH1, che corregge i mismatch base–base e i loop di inserzione–delezione che insorgono durante la replicazione del DNA. PMS2 contribuisce all’attività endonucleasica che coordina le fasi di escissione e risintesi, sostenendo la stabilità del genoma e una corretta segnalazione del danno al DNA. Attraverso il suo ruolo nella riparazione post-replicativa e nel mantenimento dell’integrità dei microsatelliti, un’alterata funzione di PMS2 è associata a un aumento dei tassi di mutazione e a risposte disregolate allo stress replicativo. In ambito di ricerca, la perturbazione di **Pms2** viene utilizzata per modellare la carenza di mismatch repair e per studiare l’accumulo di mutazioni, il crosstalk tra vie di riparazione del DNA e le risposte dei checkpoint.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PMS2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pms2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pms2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pms2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PMS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pms2 per lo studio della segnalazione di PMS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pms2 critici per la funzione di PMS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pms2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PMS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PMS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pms2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PMS2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PMS2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pms2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pms2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.