PML Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400145-ACT

O PML humano codifica a proteína da leucemia promielocítica, um organizador-chave dos corpos nucleares de PML que coordenam a regulação transcricional, as respostas a danos no DNA, a apoptose e a defesa antiviral intrínseca. O PML influencia redes de SUMOilação pós-traducional e interage com vias como a sinalização de p53, programas de genes estimulados por interferon e remodelamento da cromatina, moldando decisões de destino celular sob estresse. A desorganização ou regulação alterada da dinâmica dos corpos nucleares de PML tem sido associada à transformação oncogênica e a falhas na vigilância do genoma, com destaque na biologia das neoplasias hematológicas e em modelos mais amplos de câncer. Como proteína de ancoragem com efeitos dependentes do contexto, o PML constitui um ponto acessível para dissecar a compartimentalização nuclear e os circuitos de resposta ao estresse em células humanas.

PML O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PML sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PML O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PML em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PML, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PML. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PML nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PML no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PML em células tumorais com expressão de PML silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.