PLA2R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422280

Panoramica

Pla2r1 codifica per PLA2R, un recettore lectinico di tipo C di classe I transmembrana che lega le fosfolipasi A2 secrete e contribuisce alla cattura dei ligandi extracellulari e all’endocitosi mediata dal recettore. Regolando l’internalizzazione dei ligandi e i segnali associati alla membrana, PLA2R influenza in modo dipendente dal contesto la disponibilità di mediatori lipidici, il tono infiammatorio e le interazioni cellula–matrice. Nei tessuti murini, l’espressione di Pla2r1 è stata collegata alla biologia immunitaria e stromale, con una rilevanza riportata per i processi infiammatori e il rimodellamento fibrotico. Un’alterata attività della via di PLA2R è spesso oggetto di studio in modelli di danno d’organo e di risposte tissutali guidate dal sistema immunitario, in cui le dinamiche recettore–ligando possono plasmare i programmi trascrizionali e metabolici a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PLA2R (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pla2r1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pla2r1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pla2r1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PLA2R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pla2r1 per lo studio della segnalazione di PLA2R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pla2r1 critici per la funzione di PLA2R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pla2r1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PLA2R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PLA2R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pla2r1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PLA2R Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PLA2R (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pla2r1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pla2r1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.