Pim-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400376-ACT

PIM1 codifica Pim-1, uma quinase de serina/treonina constitutivamente ativa que integra sinais de citocinas e fatores de crescimento para regular a sobrevivência celular, a proliferação e a aptidão metabólica. Pim-1 modula redes de sinalização-chave, incluindo JAK/STAT, PI3K/AKT e NF-κB, e fosforila substratos que influenciam a progressão do ciclo celular e a apoptose, como BAD, p21 e reguladores transcricionais. Por meio dessas atividades, PIM1 afeta a função de células hematopoéticas e imunes e contribui para programas adaptativos ao estresse que podem ser cooptados em contextos oncogênicos. A expressão e a sinalização desreguladas de PIM1 têm sido associadas a alterações no controle proliferativo, a fenótipos de resistência a terapias em sistemas modelo e a estados transcricionais relevantes para a doença em múltiplos tipos de câncer.

Pim-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pim-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pim-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pim-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pim-1 em células tumorais com expressão de PIM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.