PIEZO1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-410555-NIC

PIEZO1は、機械刺激感受性をもつ非選択性カチオンチャネルをコードしており、膜張力やせん断応力をCa²⁺流入へと変換することで、細胞が機械的刺激を感知し応答することを可能にします。PIEZO1の活性は、細胞容積の制御、イオン恒常性、細胞骨格のリモデリング、ならびに遊走・接着・内皮シグナル伝達に影響するメカノトランスダクション経路などの過程を調節します。血液学的および血管の文脈では、PIEZO1を介したCa²⁺シグナルは、赤血球の水和状態と変形能、ならびに内皮細胞における流れ依存的な応答に寄与します。PIEZO1の遺伝学的・機能的な攪乱は、赤血球生理やリンパ管／血管発生の異常に関連することが示されており、機械刺激により制御されるシグナル伝達ネットワークを解明するうえで重要な標的となっています。

PIEZO1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PIEZO1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PIEZO1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PIEZO1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PIEZO1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。