PHF8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407306

Panoramica

PHF8 codifica una demetilasi istonica contenente un dominio JmjC che riconosce H3K4me3 tramite il suo dito PHD e rimuove segni repressivi di metilazione della lisina, come H3K9me2/1 e H4K20me1, modulando l’accessibilità della cromatina. Attraverso il controllo epigenetico della trascrizione, PHF8 contribuisce alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e a programmi di differenziamento specifici di linea. La funzione di PHF8 si interseca con vie di rimodellamento della cromatina e di regolazione trascrizionale che plasmano le reti di espressione genica durante lo sviluppo. La disregolazione o le mutazioni di PHF8 sono state associate a fenotipi di neurosviluppo e a stati trascrizionali alterati osservati nella riprogrammazione epigenetica correlata al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHF8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHF8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHF8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHF8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHF8 per lo studio della segnalazione di PHF8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHF8 critici per la funzione di PHF8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHF8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHF8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PHF8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHF8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHF8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PHF8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHF8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHF8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.