PHF14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411313

Panoramica

PHF14 (PHD finger protein 14) codifica un regolatore associato alla cromatina, implicato nel controllo trascrizionale attraverso il riconoscimento delle modificazioni degli istoni e il coordinamento degli stati epigenetici. È stato collegato alla regolazione dei programmi di differenziamento cellulare, alla progressione del ciclo cellulare e alle reti di espressione genica che modellano l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione dello sviluppo. Modulando l’accessibilità della cromatina, PHF14 influenza vie coinvolte nella specificazione di linea e nell’omeostasi tissutale, con rilevanza per la regolazione trascrizionale aberrante osservata nel cancro e nei disturbi dello sviluppo. La ricerca su PHF14 ne supporta l’impiego come nodo per analizzare fenotipi guidati dalla cromatina, quali proliferazione e migrazione alterate ed espressione genica dipendente dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHF14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHF14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHF14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHF14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHF14 per lo studio della segnalazione di PHF14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHF14 critici per la funzione di PHF14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHF14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHF14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PHF14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHF14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHF14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PHF14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHF14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHF14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.