PGAM5 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-428371-LAC

Il gene murino Pgam5 codifica PGAM5, una fosfatasi serina/treonina ancorata ai mitocondri che integra il controllo di qualità mitocondriale con la segnalazione dello stress. PGAM5 modula la mitofagia e la dinamica mitocondriale tramite interazioni con PINK1/Parkin e con la macchina di fissione, e può influenzare vie di morte cellulare programmata legate allo stress ossidativo. Regolando nodi di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione, PGAM5 collega la disfunzione mitocondriale a processi infiammatori e rilevanti per la neurodegenerazione, rendendola un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di adattamento allo stress nelle cellule dei mammiferi. Un’attività alterata di PGAM5 è stata associata a uno squilibrio nella regolazione tra apoptosi e necrosi e a perturbazioni dell’omeostasi energetica, a supporto della sua rilevanza in modelli di biologia delle malattie metaboliche e infiammatorie.

Le particelle di attivazione lentivirale PGAM5 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pgam5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PGAM5 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pgam5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PGAM5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pgam5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.