PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-400725-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- PEPCK-M/PCK2 CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 PCK2 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 PEPCK-M/PCK2 Antibody (62-W): sc-130388
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-400725-ACT | 20 µg | $397.00 |
인간 PCK2 유전자는 미토콘드리아형 포스포엔올피루브산 카복시키나아제(PEPCK-M)를 암호화한다. PEPCK-M은 GTP를 사용해 옥살로아세트산을 포스포엔올피루브산으로 전환하는 핵심 포도당신생합성 효소이다. 미토콘드리아의 애나플레로시스/카타플레로시스를 세포질의 탄수화물 및 지질 생합성과 연결함으로써, PEPCK-M은 TCA 회로 플럭스, 레독스 균형, 그리고 영양 상태에 따른 대사적 유연성의 조정을 돕는다. PCK2 활성은 중심 탄소 대사와 연관되어 있으며 포도당신생합성, 글리세로네오제네시스, 아미노산 유래 탄소 이용을 포함한 경로들에 영향을 줄 수 있다. PCK2 발현의 변화는 포도당 항상성 장애 및 종양 대사에서 관찰되는 대사 재배선과 연관되어 보고되어 왔으며, 따라서 생합성 프로그램에 대한 미토콘드리아의 조절을 연구하는 데 유용한 결절점으로 여겨진다.
PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 PCK2 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
PEPCK-M/PCK2 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 PCK2 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 PCK2 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 PEPCK-M/PCK2 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 PCK2 위치를 보존하고 내인성 위치에서 PEPCK-M/PCK2 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 PCK2 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 PEPCK-M/PCK2 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.