PDP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406956

Panoramica

La fosfatasi della piruvato deidrogenasi, subunità catalitica 2 (PDP2), è un enzima mitocondriale che defosforila e attiva il complesso della piruvato deidrogenasi, promuovendo così la conversione del piruvato in acetil-CoA e coordinando l’ingresso dei carboni derivati dalla glicolisi nel ciclo dell’acido citrico (TCA). Modulando l’attività della PDH, PDP2 contribuisce alla flessibilità metabolica, all’equilibrio redox e all’omeostasi energetica cellulare, collegando la disponibilità di nutrienti al metabolismo ossidativo. Un’alterata regolazione dell’asse PDH–PDP è associata alla riprogrammazione metabolica osservata in disturbi che compromettono la funzione mitocondriale e in contesti di utilizzo anomalo di glucosio e lipidi, rendendo PDP2 un nodo utile per lo studio della bioenergetica mitocondriale. PDP2 offre inoltre un punto di accesso per interrogare gli input di segnalazione che modulano lo stato di fosforilazione della PDH e i processi a valle dipendenti dall’acetil-CoA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDP2 per lo studio della segnalazione di PDP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDP2 critici per la funzione di PDP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.