PDE7B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411961-ACT

ヒトのPDE7Bは、cAMP特異的ホスホジエステラーゼであるホスホジエステラーゼ7Bをコードしており、環状AMP（cAMP）を5′-AMPへ加水分解することで、細胞内cAMPシグナル伝達の振幅と持続時間を調節します。PKA/CREBを介した転写や、その下流にある免疫・神経のシグナル伝達プログラムの調節など、cAMP依存性経路を制御することにより、PDE7Bは細胞の活性化、分化、生存の制御に寄与します。PDE7Bの発現および活性は炎症性シグナル伝達ネットワークや神経生物学的に関連するプロセスと関連づけられており、cAMPのコンパートメント化やシグナル統合を研究するうえで有用なノードとなります。PDE7B関連シグナルの異常は、免疫機能障害や中枢神経系（CNS）に関わる表現型に関連する状況で報告されており、疾患モデルにおける経路モジュレーターとしての検討を支持します。

PDE7B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDE7Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDE7B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDE7B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDE7B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDE7Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDE7B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDE7B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDE7B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDE7B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。