PDE4B Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422161-LAC

Il gene Pde4b del topo codifica la fosfodiesterasi specifica per il cAMP PDE4B, un regolatore chiave della segnalazione intracellulare dei secondi messaggeri che termina le risposte al cAMP idrolizzando il cAMP in 5′-AMP. Modellando la trascrizione dipendente da cAMP/PKA/CREB e il feedback sulla segnalazione MAPK, PDE4B influenza l’integrazione dei segnali guidati dai recettori e le soglie di attivazione cellulare. L’attività di PDE4B contribuisce alla modulazione delle reti di segnalazione infiammatoria, incluse le vie a valle della stimolazione da citochine e dei recettori Toll-like, ed è spesso studiata nel contesto della funzione delle cellule immunitarie. Un’espressione o una segnalazione di PDE4B deregolate sono state associate a fenotipi infiammatori e a processi neuroimmuni, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi di vie di segnalazione rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE4B (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pde4b in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE4B (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pde4b, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PDE4B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pde4b e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.