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PDE4B慢病毒激活颗粒(m) | sc-422161-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Pde4b 基因编码 cAMP 特异性磷酸二酯酶 PDE4B。PDE4B 是细胞内第二信使信号的关键调控因子,通过将 cAMP 水解为 5′-AMP 来终止 cAMP 介导的反应。通过塑造依赖 cAMP/PKA/CREB 的转录并对 MAPK 信号进行反馈调控,PDE4B 影响受体驱动的信号整合以及细胞激活阈值。PDE4B 活性参与调节炎症信号网络,包括细胞因子与 Toll 样受体刺激下游的通路,因此常在免疫细胞功能研究中被重点关注。PDE4B 表达或信号的失调与炎症表型及神经免疫过程相关,使其可作为疾病相关通路研究中的关键机制节点。
PDE4B 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Pde4b 表达。
PDE4B 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Pde4b转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性PDE4B表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Pde4b 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。