PDE4B Double Nickaseプラスミド (m): sc-422161-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PDE4B Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PDE4Bダブルニカースプラスミド（m）およびPDE4Bダブルニカースプラスミド（m2）は、Pde4bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PDE4B Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDE4B Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのPde4bは、cAMP特異的ホスホジエステラーゼであるホスホジエステラーゼ4B（PDE4B）をコードしており、環状AMP（cAMP）を5′-AMPへ加水分解することでシグナル伝達を終結させます。区画化されたcAMP/PKAシグナル伝達を形成することにより、PDE4Bは、CREB依存性遺伝子発現などの転写出力に影響するリン酸化プログラムや、GPCR活性化に対する細胞種特異的な応答を制御します。PDE4B活性は、cAMP量がサイトカイン産生、白血球活性化、ならびに細胞内cAMPを上昇させる受容体下流でのシグナル統合を調節する免疫・炎症性シグナルネットワークにおいて特に重要です。PDE4B依存的なcAMP制御の破綻は免疫機能異常や神経行動学的表現型と関連づけられており、マウスの細胞系およびin vivoモデルにおける機序解明研究の標的として有用です。
PDE4B ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Pde4b 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Pde4b内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Pde4bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Pde4bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。