PCGF6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404420-ACT

PCGF6 (polycomb group ring finger 6) è una proteina del gruppo Polycomb contenente un dominio RING finger che partecipa alla repressione trascrizionale epigenetica attraverso assemblaggi non canonici del complesso repressivo Polycomb 1 (PRC1). Interagendo con RNF2/RING1B e fattori correlati, PCGF6 contribuisce alla monoubiquitinazione dell’istone H2A in lisina 119 (H2AK119ub), alla compattazione della cromatina e al controllo coordinato di programmi di espressione genica che regolano il mantenimento delle cellule staminali, la differenziazione e la progressione del ciclo cellulare. Le reti regolatorie collegate a PCGF6 intersecano vie che controllano il silenziamento dei geni dello sviluppo e la stabilità del genoma, rendendolo rilevante per lo studio di stati della cromatina deregolati osservati in diversi contesti oncologici e di biologia dello sviluppo. Alterazioni dell’attività di PCGF6 sono state associate a cambiamenti nella plasticità trascrizionale e in firme geniche legate alla proliferazione, a supporto del suo impiego come nodo per studi meccanicistici del controllo epigenetico.

PCGF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PCGF6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PCGF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PCGF6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PCGF6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PCGF6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PCGF6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PCGF6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PCGF6 nelle cellule tumorali con espressione di PCGF6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.