PATZ1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404881-LAC

PATZ1 (POZ/BTB e zinc finger 1 contenente AT-hook) è un fattore di trascrizione nucleare che si lega a DNA ricco di AT e interagisce con complessi regolatori della cromatina per modulare programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento e apoptosi. Attraverso il dominio BTB/POZ e i moduli di legame al DNA a dita di zinco, PATZ1 partecipa sia alla repressione sia all’attivazione trascrizionale, influenzando il controllo del ciclo cellulare, l’impegno di linea e le vie di risposta allo stress. Alterazioni dell’espressione o della funzione di PATZ1 sono state associate a fenotipi oncogenici e dello sviluppo, inclusi network trascrizionali deregolati che incidono sulla biologia tumorale e sulla plasticità cellulare. In quanto regolatore dipendente dal contesto, PATZ1 rappresenta un utile punto di accesso per analizzare circuiti guidati da fattori di trascrizione, controllo epigenetico e robustezza delle reti geniche nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PATZ1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PATZ1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PATZ1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PATZ1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PATZ1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PATZ1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.