PARP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419018-NIC

Il gene murino Parp1 codifica la poli(ADP-ribosio) polimerasi 1 (PARP1), un sensore del danno al DNA associato alla cromatina che catalizza la PARilazione di sé stessa e di altre proteine nucleari in risposta a rotture a singolo e a doppio filamento. PARP1 coordina la riparazione per escissione di basi e la riparazione delle rotture a singolo filamento e influenza la stabilità delle forcelle di replicazione attraverso il reclutamento di fattori di riparazione del DNA e il rimodellamento della struttura della cromatina. Oltre al mantenimento del genoma, PARP1 modula programmi trascrizionali e la segnalazione infiammatoria, incluso il crosstalk con NF-κB e le vie di risposta allo stress. Un’attività di PARP1 deregolata o un’espressione alterata di Parp1 è associata a instabilità genomica ed è spesso oggetto di studio in contesti quali la biologia del cancro, la neurodegenerazione e il danno tissutale correlato all’ischemia in modelli murini.

PARP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Parp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Parp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Parp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Parp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.