PARP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400046-NIC

PARP1は、DNAの一本鎖切断を検知し、自身および他のクロマチン関連タンパク質のポリ（ADP-リボシル）化を触媒する核内酵素であるポリ（ADP-リボース）ポリメラーゼ1をコードする。PARP1は、塩基除去修復および一本鎖切断修復で中心的な役割を担い、タンパク質のリクルートやクロマチンの弛緩を介して、複製ストレス応答、転写制御、ゲノム安定性維持の経路とも連携する。PARP1の活性や発現の変化は、DNA損傷シグナル伝達の異常、変異の蓄積、遺伝毒性ストレス下での細胞生存制御の破綻と関連し、がん化や治療応答のモデルにおいて広く研究されている重要な要素である。さらにPARP1は、持続的なDNA損傷やPAR代謝が細胞運命や遺伝子発現プログラムに影響し得る神経変性や炎症の文脈でも研究されている。

PARP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PARP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PARP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PARP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PARP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。