PARP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400046-ACT

PARP1は、核内のDNA損傷センサーであるポリ（ADP-リボース）ポリメラーゼ1をコードし、自身および他のクロマチン関連タンパク質をPAR化（PARylation）することでDNA修復を協調的に制御します。PARP1は塩基除去修復および一本鎖切断修復で中心的な役割を担い、さらにヒストンや修復スキャフォールドとの相互作用を介して、クロマチンリモデリング、複製フォークの安定性、転写制御にも影響を及ぼします。ATM/ATRシグナル伝達やより広範なゲノム維持ネットワークとのクロストークを通じて、PARP1は酸化ストレスや複製ストレス下でのゲノム完全性の維持に寄与します。PARP1活性の制御異常やDNA修復能の変化は、複数のがんで観察されるゲノム不安定性の表現型や、神経変性に関連するストレス応答としばしば関連しており、DNA修復研究における機序解明の標的としての有用性を支持しています。

PARP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PARP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PARP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PARP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPARP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PARP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPARP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPARP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPARP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPARP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。