P2X7 Plasmide Double Nickase (m): sc-422093-NIC

Il gene murino **P2rx7** codifica il canale cationico P2X7 attivato dall’ATP, un recettore purinergico trimerico che, in risposta a elevate concentrazioni extracellulari di ATP, media l’ingresso di Na⁺ e Ca²⁺ e l’efflusso di K⁺. La segnalazione di P2X7 sostiene l’attivazione dell’inflammasoma, la maturazione di IL-1β, la permeabilizzazione della membrana e vie infiammatorie a valle, tra cui NLRP3, MAPK e NF-κB, influenzando il rilascio di citochine e i programmi di morte cellulare. Nelle cellule immunitarie e gliali, P2X7 contribuisce a collegare i segnali di pericolo mediati dall’ATP all’attivazione microgliale, alle funzioni effettrici dei macrofagi e alla regolazione di proliferazione e apoptosi. Un’attività disregulated di P2X7 è stata implicata nella neuroinfiammazione, nelle patologie autoimmuni, nei meccanismi del dolore cronico e nell’infiammazione associata ai tumori, rendendo **P2rx7** un bersaglio ampiamente studiato nei modelli di immunologia e neuroscienze.

P2X7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2rx7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2rx7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2rx7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2rx7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.