P2X2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403517-ACT

O P2RX2 humano codifica o receptor P2X2 ativado por ATP, um canal catiônico trimérico não seletivo que medeia um influxo rápido de Na⁺/Ca²⁺ em resposta a nucleotídeos extracelulares. A sinalização de P2X2 modula a excitabilidade de membrana, vias de segundos mensageiros dependentes de Ca²⁺ e a transcrição dependente de atividade em neurônios e epitélios sensoriais, influenciando a transmissão sináptica, a neurosecreção e o processamento sensorial. Esse receptor purinérgico participa da comunicação mediada por ATP durante estresse tecidual e inflamação, integrando-se a redes mais amplas de sinalização neuroimune. Alterações na função de P2RX2/P2X2 têm sido associadas a fenótipos sensoriais e neurológicos, sustentando seu estudo em mecanismos subjacentes à sinalização auditiva e nociceptiva e em vias relacionadas a canalopatias.

P2X2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de P2RX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

P2X2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus P2RX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição P2RX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de P2X2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus P2RX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de P2X2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via P2X2 em células tumorais com expressão de P2RX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.