P23 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402670-ACT

Il gene umano **PTGES3** codifica **p23**, un co-chaperone conservato di **HSP90** che stabilizza i complessi proteici “client” e modula il ciclo ATPasico per sostenere la maturazione proteica e la trasduzione del segnale. p23 è noto soprattutto per la regolazione dell’assemblaggio dei recettori degli ormoni steroidei e della segnalazione nucleare, ma partecipa anche a reti più ampie di proteostasi che influenzano le risposte allo stress cellulare e il controllo trascrizionale. Grazie alla sua integrazione con vie dipendenti dai chaperoni, PTGES3 può incidere su proliferazione e differenziamento cellulari, nonché sulle risposte adattative allo stress proteotossico. Alterazioni dell’equilibrio tra chaperoni e co-chaperoni e la deregolazione della segnalazione recettoriale sono state associate a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi contesti di biologia tumorale e segnalazione infiammatoria, rendendo PTGES3 un nodo utile per studi meccanicistici.

P23 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTGES3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

P23 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTGES3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTGES3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di P23. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTGES3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da P23 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via P23 nelle cellule tumorali con espressione di PTGES3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.