Ox40 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401326-ACT

O TNFRSF4 humano codifica o OX40 (CD134), uma molécula coestimulatória induzível da superfamília de receptores de TNF, expressa principalmente em células T ativadas, que reforça respostas desencadeadas por antígenos e sustenta a diferenciação de células efetoras e de memória. A ligação do OX40 promove o recrutamento de proteínas adaptadoras TRAF e a ativação das vias de sinalização NF-κB, MAPK e PI3K–AKT, moldando a produção de citocinas, a sobrevivência e a proliferação na imunidade adaptativa. A desregulação da sinalização OX40–OX40L tem sido associada a alterações na tolerância imune e em programas inflamatórios observados na autoimunidade, na biologia de transplantes e em microambientes imunes tumorais. Assim, o TNFRSF4 é amplamente estudado em modelos de ativação de células T, checkpoints de coestimulação e interações célula–célula do sistema imune.

Ox40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ox40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ox40. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ox40 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ox40 em células tumorais com expressão de TNFRSF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.