OX2R CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404121-ACT

ヒトCD200R1は、炎症性活性化を抑制するためにCD200と結合する、骨髄系細胞系列のチェックポイント受容体である抑制性免疫受容体OX2Rをコードする。OX2Rシグナルは、リン酸化依存的な抑制経路を介してサイトカイン産生および抗原提示細胞の成熟を抑え、最終的にMAPKおよびNF-κB活性の低下へと収束することで、自然免疫と獲得免疫のクロストークを調節する。この軸は、ミクログリアの恒常性や末梢マクロファージ応答の制御にも関与し、がん、自己免疫疾患、神経炎症性疾患モデルでみられる免疫回避や慢性炎症状態との関連が示唆されている。そのため、CD200R1は免疫寛容、組織障害応答、腫瘍関連骨髄系細胞の表現型を制御する経路の研究でしばしば取り上げられている。

OX2R CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD200R1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OX2R CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD200R1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD200R1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OX2Rの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD200R1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOX2R依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD200R1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOX2R経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。