OLIG2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400670-ACT

OLIG2 codifica un fattore di trascrizione basic helix-loop-helix (bHLH) che coordina la specificazione della linea neurale, con ruoli di primo piano nel patterning del tubo neurale ventrale e nell’impegno dei programmi dei precursori degli oligodendrociti e dei motoneuroni. Attraverso reti trascrizionali specifiche per stadio, OLIG2 interagisce con vie di segnalazione dello sviluppo come SHH e Notch per regolare la proliferazione dei progenitori, la tempistica della differenziazione e le decisioni di destino gliale. L’espressione deregolata di OLIG2 è spesso studiata nel contesto di anomalie del neurosviluppo e della biologia dei tumori cerebrali, dove è stata associata ad alterazioni del controllo dello stato cellulare e della capacità proliferativa. In quanto regolatore che definisce una linea cellulare, OLIG2 rappresenta un nodo chiave per analizzare i circuiti di regolazione genica che governano il comportamento delle cellule staminali/progenitrici neurali e la maturazione oligodendrogliale.

OLIG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OLIG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OLIG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OLIG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OLIG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OLIG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OLIG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OLIG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OLIG2 nelle cellule tumorali con espressione di OLIG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.