OLIG1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402725-ACT

OLIG1 (fattore di trascrizione degli oligodendrociti 1) è un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix (bHLH) che regola la specificazione della linea oligodendrogliale, la maturazione e l’espressione dei geni della mielina nel sistema nervoso centrale umano. Agisce all’interno di reti trascrizionali dello sviluppo insieme ad altri fattori bHLH correlati e coopera con vie di segnalazione che coordinano le decisioni di destino dei progenitori neurali e la differenziazione gliale. I programmi dipendenti da OLIG1 modellano la cromatina e gli stati trascrizionali che influenzano la capacità di rimielinizzazione e le risposte cellulari al danno. Un’attività di OLIG1 deregolata o un’alterata differenziazione degli oligodendrociti è stata implicata in contesti demielinizzanti e neurosviluppo, a supporto del suo impiego come bersaglio per studi meccanicistici sulla mielinizzazione e sulla biologia gliale.

OLIG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OLIG1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OLIG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OLIG1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OLIG1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OLIG1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OLIG1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OLIG1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OLIG1 nelle cellule tumorali con espressione di OLIG1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.