ODC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401055

Panoramica

ODC1 codifica l’ornitina decarbossilasi (ODC), l’enzima limitante nella biosintesi delle poliamine che converte l’ornitina in putrescina, sostenendo la produzione di spermidina e spermina, necessarie per la replicazione del DNA, l’organizzazione della cromatina e la traduzione. L’attività di ODC è strettamente controllata dalla degradazione mediata da antizima e si integra con il metabolismo degli amminoacidi, con la segnalazione di crescita collegata a mTOR e con la progressione del ciclo cellulare. Un metabolismo delle poliamine deregolato e un’elevata espressione di ODC1 sono spesso associati a fenotipi proliferativi, adattamento metabolico e programmi trascrizionali oncogenici, rendendo ODC1 un nodo utile per studiare il controllo della crescita e le risposte allo stress. La perturbazione di ODC1 fornisce inoltre informazioni per la ricerca su apoptosi, tamponamento dello stress ossidativo e segnalazione immunitaria o infiammatoria, in cui le poliamine modulano l’espressione genica e la fitness cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ODC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ODC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ODC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ODC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ODC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ODC1 per lo studio della segnalazione di ODC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ODC1 critici per la funzione di ODC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ODC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ODC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ODC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ODC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ODC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ODC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ODC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ODC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.