OCTN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403258-ACT

SLC22A4 codifica o transportador humano de cátions orgânicos/carnitina OCTN1, um transportador de solutos poliespecífico que regula a captação e o efluxo celulares de pequenos metabólitos catiônicos através da membrana plasmática. O OCTN1 contribui para o processamento de nutrientes e para a homeostase redox ao transportar substratos como a ergotionina e outros cátions orgânicos relacionados, influenciando a capacidade antioxidante intracelular e a adaptação metabólica. Por meio dessas atividades de transporte, o SLC22A4 se integra a redes de transporte de membrana que moldam a função de barreira epitelial, a fisiologia de células imunes e a disposição de xenobióticos. Variações genéticas e alterações na expressão de SLC22A4 têm sido associadas na literatura a fenótipos inflamatórios e autoimunes e a mudanças nas respostas celulares ao estresse, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos em imunometabolismo e biologia epitelial.

OCTN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC22A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OCTN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC22A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC22A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OCTN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC22A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OCTN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OCTN1 em células tumorais com expressão de SLC22A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.