OC-STAMP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406422

Panoramica

OCSTAMP codifica OC‑STAMP, una proteina transmembrana multipasso necessaria per la fusione cellula‑cellula degli osteoclasti e per la formazione di osteoclasti multinucleati riassorbitori di osso. OC‑STAMP coopera con regolatori della fusione come DCSTAMP e si integra nei programmi di osteoclastogenesi guidati da RANKL, influenzando il rimodellamento del citoscheletro e la dinamica di membrana durante la differenziazione. Attraverso il suo ruolo nella maturazione degli osteoclasti, un’alterata attività di OCSTAMP è rilevante per studi sull’omeostasi scheletrica e su disturbi caratterizzati da un riassorbimento osseo deregolato, incluse patologie osteolitiche in contesti infiammatori e metabolici. Inoltre, l’espressione di OC‑STAMP nelle cellule della linea mieloide supporta l’indagine su come la competenza alla fusione influenzi il crosstalk immunità–osso e il rimodellamento tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-STAMP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OCSTAMP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OCSTAMP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OCSTAMP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OC-STAMP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OCSTAMP per lo studio della segnalazione di OC-STAMP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OCSTAMP critici per la funzione di OC-STAMP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OCSTAMP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OC-STAMP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OC-STAMP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OCSTAMP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OC-STAMP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OC-STAMP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OCSTAMP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OCSTAMP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.