OC-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406357

Panoramica

ONECUT3 codifica per il fattore di trascrizione OC-3, un membro della famiglia onecut caratterizzata da un dominio CUT e da un dominio homeobox di legame al DNA, che coordinano programmi di espressione genica specifici di tessuto. OC-3 contribuisce alla regolazione della differenziazione cellulare e della specificazione di linea controllando reti trascrizionali che modellano stati di sviluppo e metabolici. Nella biologia umana, i pattern di espressione di ONECUT3 sono stati collegati alla modulazione dei circuiti regolatori genici epiteliali ed epatici e, più in generale, al controllo trascrizionale di vie correlate all’organogenesi. L’attività deregolata dei membri della famiglia onecut è stata studiata nel contesto di alterazioni della differenziazione, della proliferazione e della riprogrammazione trascrizionale associata ai tumori, a supporto del suo impiego come nodo per studi meccanicistici di reti geniche rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ONECUT3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ONECUT3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ONECUT3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OC-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ONECUT3 per lo studio della segnalazione di OC-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ONECUT3 critici per la funzione di OC-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ONECUT3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OC-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OC-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ONECUT3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OC-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OC-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ONECUT3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ONECUT3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.